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腦組織消化手冊

 更新時間:2016-02-16 點(diǎn)擊量:929

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Worthington組織消化指南

引言

組織消化酶主要用于組織培養(yǎng)和細(xì)胞生物學(xué)研究的原代細(xì)胞的分離和收集。盡管這些消化酶已經(jīng)普遍應(yīng)用多年,但是對其組織消化和細(xì)胞收集的作用機(jī)制卻沒有全面的理解。  由此導(dǎo)致的結(jié)果便是選擇一種消化方法大多是隨機(jī)選擇或基于過去的經(jīng)驗(yàn),而不是在*理解消化原理的基礎(chǔ)上選擇的消化方案,以及如何根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)?zāi)康男拚桨敢垣@得更好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

細(xì)胞分離程序的目的是zui大程度的獲得功能活性的單個細(xì)胞,而影響結(jié)果的原因有很多,包括(不限于)以下:

1、組織類型

2、物種來源

3、動物年齡

4、遺傳改造情況(如knockouts

5、所用的消化培養(yǎng)液

6、所用的酶

7、消化酶中的雜質(zhì)

8、所用消化酶的工作濃度

9、溫度

10、孵育時間

通常前四個原因沒辦法選擇,而剩下的原因一般由經(jīng)驗(yàn)決定以獲取zui適實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

通過查閱文獻(xiàn)來選擇*組織消化酶和zui適消化條件的研究人員通常被互相矛盾的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)搞得一頭霧水。這些巨大差異來源于組織胞外基質(zhì)的復(fù)雜而動態(tài)的特性,以及過去常用的粗制、未提純的組織分離酶。另外,組織胞外基質(zhì)由各種蛋白、糖蛋白、脂類和糖脂組成,這些成分的組成比例在不同物種、不同組織、甚至不同發(fā)育(年齡)之間存在明顯的差異,這些因素都極大的影響了消化方案的制定。目前通常使用的粗制酶,如鏈霉蛋白酶、NF1:250、以及含有幾種其他不同濃度蛋白酶的膠原酶、以及各種多糖酶、核酶和脂酶。

本指南總結(jié)了目前常用組織消化酶的zui適消化和細(xì)胞收集知識和方法,描述了標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)步驟, 便于制定一個*的細(xì)胞分離方案,同時列舉了一些相關(guān)的參考文獻(xiàn)。

下表列出多種組織的適宜消化酶(含參考文獻(xiàn),以組織類型和物種分類,詳見鏈接)

脂肪組織

腎上腺組織

骨組織

腦組織

軟骨組織

結(jié)腸組織

內(nèi)皮組織

上皮組織

心臟

淋巴結(jié)

乳腺

其它組織

其他組織

肌組織

神經(jīng)組織

胰腺

腮腺

垂體

前列腺

生殖

動物鱗片

皮膚

脾臟

干細(xì)胞

胸腺

甲狀腺/甲狀旁腺

扁桃體

腫瘤

 

 

 

注:使用Worthington公司消化酶的文獻(xiàn)不限于上表鏈接中所列,一般而言,Worthington公司的組織消化酶可用于大多組織類型的消化。

 

腦組織分離手冊

 

物種詳細(xì)來源細(xì)胞名稱消化用酶培養(yǎng)基參考文獻(xiàn)
Microvascular endothelialNeutral Protease: 0.005%Medium 199Kanda, T., Yoshino, H., Ariga, T., Yamawaki, M., and Yu, R.: Glycosphingolipid Antigens in Cultured Microvasular Bovine Brain Endothelial Cells: Sulfoglucuronosyl Paragloboside as a Target of Monoclonal IgM in Demyelinative Neuropathy, J Cell Biol 126 (1), 235, 1994
Brain endothelial cellsCollagenase Type 2: 0.35%DMEMWolburg H, Neuhaus J, Kniesel U, Krauss B, Schmid EM, Ocalan M, Farrell C, Risau W: Modulation of tight junction structure in blood-brain barrier endothelial cells. Effects of tissue culture, second messengers and cocultured astrocytes, J Cell Sci 107, 1347, 1994
EndothelialNeutral Protease: 0.125%MEMMiller, D., Audus, K., and Borchardt, R.: Application of Cultured Endothelial Cells of the Brain Microvasculature in the Study of the Blood-Brain Barrier, J Tiss Cul Meth 14, 217, 1992
牛, 成年的Cerebral arteryCollagenase: 0.2%HBSSMachi, T., Kassell, N.F., and Scheld, W.M.: Isolation and Characterization of Endothelial Cells From Bovine Cerebral Arteries, In Vitro Cell Dev Biol 26, 291, 1990
Endothelial
Capillary endothelialCollagenase: 0.1%DMEMEstrada, C., Bready, J., Berliner, J., and Cancilla, P.: Choline Uptake by Cerebral Capillary Endothelial Cells in Culture, J Neurochem 54, 1467, 1990
EndothelialNeutral Protease: 0.5%MEMAudus, K., and Borchardt, R.: Characterization of an In Vitro Blood-Brain Barrier Model System for Studying Drug Transport and Metabolism, Pharm Res 3 (2), 81, 1986
EndothelialCollagenase Type 2: 0.2%Dulbecco's PBSGoetz, I.., Warren, J., Estrada, C., Roberts, E., and Krause, D.: Long-Term C*tion of Arterial and Capillary Endothelium From 成年的 Bovine Brain, In Vitro Cell Dev Biol 21, 172, 1985
Brain arteries
Calf OligodendrogliaTrypsin: 0.1%(see reference)Poduslo, S., Miller, K., and McKhann, G.: Metabolic Properties of Maintained Oligodendroglia Purified from Brain, J Biol Chem 253, 1592, 1978
(also lamb)Neural
豚鼠豚鼠, 200-400 gNeuronsTrypsin: 0.06-0.08%PIPES salineKay, A.R., and Wong, R.K.S.: Isolation of Neurons Suitable for Patch-Clamping from 成年的 Mammalian Central Nervous Systems, J Neurosci Methods 16, 227, 1986
人類人類TumorCollagenase Type 4: 0.1%see referenceSauvageot, C., Weatherbee, J., Kesari, S., Winters, S., Barnes, J., Dellagatta, J., Ramakrishna, N., Stiles, C., Kung, A., Kieran, M. and Wen, P.: Efficacy of the HSP90 Inhibitor 17-AAG in Human Glioma Cell Lines and Tumorigenic Glioma Stem Cells.,Neuro Oncol Vol. 11,, , 109, 2009
Hyaluronidase: 0.07%
Deoxyribonuclease I: 0.04%
人類人類MicrogliaTrypsin: 0.25%DMEM/F12Klegeris Andis, McGeer PatrickL: Chymotrypsin-like proteases contribute to human monocytic THP-1 cell as well as human microglial neurotoxicity, Glia 51, 56-64, 2005
Deoxyribonuclease I: .005%
人類人類MicrovesselsCollagenase Type 4: 0.1%DMEMGerhart, D. Z., Broderius, M. A., and Drewes, L. R.: Cutlured Human and Canine Endothelial Cells from Brain Microvessels, Brain Res Bull 21, 785, 1988
人類人類NeuronalDeoxyribonuclease I: 10 礸/mlTris-HCl, 50 mM, CaCl2, 2 mMRoher, A.E., Palmer, K.C., Chau, V., and Ball, M.J.: Isolation and Chemical Characterization of Alzheimer's Disease Paired Helical Filament Cytoskeletons:Differentiation from Amyloid Plaque Core Protein, J Cell Biol 107, 2703, 1988
人類人類, 15-54 歲MicrovesselsCollagenase: 0.1%Serum-free modified Lewis mediumVinters, H.V., Reave, S., Coslo, P., Girvin, J.P., and Moore, S.A.: Isolation and Culture of Cells Derived From Human Cerebral Microvessels, Cell Tissue Res 249, 657, 1987
昆蟲果蠅NeuronsPapain: 20 u/mlSalineGu, H. and O'Dowd, D.: Whole Cell Recordings from Brain of 成年的 Drosophila., J Vis Exp 6, 248, 2007
昆蟲果蠅NeuronsPapain: 4 u/mlDMEMSicaeros, B. Campusano, J. and O'Dowd, D.: Primary Neuronal Cultures from the Brains of Late Stage Drosophila Pupae., J Vis Exp 4, 200, 2007
猴, 獼猴Brain cellsCollagenase Type 2: 500 u/mlHBSSMarcondes MC, Burudi EM, Huitron-Resendiz S, Sanchez-Alavez M, Watry D, Zandonatti M, Henriksen SJ, Fox HS: Highly activated CD8(+) T cells in the brain correlate with early central nervous system dysfunction in simian immunodeficiency virus infection, J Immunol 167, 5429-38, 2001
Deoxyribonuclease I: 28 u/ml
小鼠小鼠Chloroid plexusCollagenase Type 4: 400 u/mlPBSBaruch, K., Rosenzweig, N., Kertser, A., Deczkowska, A., Sharif, A., Spinrad, A., Tsitsou-Kampeli, A., Sarel, A., Cahalon, L. and Schwartz, M.: Breaking Immune Tolerance by Targeting Foxp3(+) Regulatory T Cells Mitigates Alzheimer's Disease Pathology., Nat Commun 6, 7967, 2015
小鼠小鼠Brain-sequestered leukocytesCollagenase Type 4: 0.05%RPMIRyg-Cornejo, V., Ioannidis, L. and Hansen, D.: Isolation and Analysis of Brain-Sequestered Leukocytes from Plasmodium Berghei ANKA-Infected Mice., J Vis Exp71, e50112, 2013
Deoxyribonuclease I: 2 u/ml
小鼠小鼠Cerebral pericytesCollagenase Type 2: 0.1%DMEMShah. G., Price, T., Banks, W., Morofuji, Y., Kovac, A., Ercal, N., Sorenson, C., Shin, E., Sheibani, N.: Pharmacological Inhibition of Mitochondrial Carbonic Anhydrases Protects Mouse Cerebral Pericytes from High Glucose-Induced Oxidative Stress and Apoptosis., J Pharmacol Exp Ther 344, 637-45, 2013
Deoxyribonuclease I: 30 u/ml
小鼠小鼠, P13-15GlialPapain: 20 u/mlEBSSHaseleu, J., Anlauf, E., Blaess, S., Endl, E. and Derouiche, A.: Studying Subcellular Detail in Fixed Astrocytes: Dissociation of Morphologically Intact Glial Cells (DIMIGs)., Front Cell Neurosci 7, 54, 2013
Deoxyribonuclease I: 0.0005%
小鼠小鼠, 成年的NeuronsPDS kit: with modificationsDMEM/F12Saxena, A., Wagatsuma, A., Noro, Y., Kuji, T., Asaka-Oba, A., Watahiki, A., Gurnot, C., Fagiolini, M., Hensch, T. and Carninci, P.: Trehalose-Enhanced Isolation of Neuronal Sub-Types from 成年的 Mouse Brain., Biotechniques 52, 381, 2012
小鼠小鼠, 1-2 天Oligodendrocytes, dorsal root gangliaPapain: 0.15%DMEMO'Meara, R., Ryan, S., Colognato, H. and Kothary, R.: Derivation of Enriched Oligodendrocyte Cultures and Oligodendrocyte/Neuron Myelinating Co-Cultures from Post-Natal Murine Tissues., J Vis Exp 54, 3324, 2011
Deoxyribonuclease I: 0.006%
小鼠小鼠, 6-12周Vascular smooth muscle cellsPapain: 0.05%PBSChung, W., Farley, J., Swenson, A., Barnard, J., Hamilton, G., Chiposi, R. and Drummond, H.: Extracellular Acidosis Activates ASIC-like Channels in Freshly Isolated Cerebral Artery Smooth Muscle Cells., Am J Physiol Cell Physiol 298, C1198, 2010
Collagenase Type 4: 0.15%
Elastase: 0.05%
小鼠小鼠, 4-6 天NeuronsPDS kit: with modificationsHBSSLee, H., Greene, L., Mason, C. and Manzini, M.: Isolation and Culture of Post-Natal Mouse Cerebellar Granule Neuron Progenitor Cells and Neurons., J Vis Exp23, 990, 2009
小鼠小鼠, 產(chǎn)后的AstrocytesTrypsin: 0.25%HBSSSher, F., Rossler, R., Brouwer, N., Balasubramaniyan, V., Boddeke, E. and Copray, S.: Differentiation of Neural Stem Cells Into Oligodendrocytes: Involvement of the Polycomb Group Protein Ezh2., Stem Cells 26, 2875, 2008
Deoxyribonuclease I: 1,000 u/ml
小鼠小鼠, 初生的NeuronsPapain: 20 u/mlNeurobasalFasano, C., Thibault, D. and Trudeau, L.: Culture of Postnatal Mesencephalic Dopamine Neurons on an Astrocyte Monolayer,Current Protocols in Neuroscience Vol. 44,, , 3.21.1, 2008
小鼠小鼠, 胚胎和出生后Cortical neuronsPapain: 4-10 u/mlNeurobasalHilgenberg, L. and Smith, M.: Preparation of Dissociated Mouse Cortical Neuron Cultures., J Vis Exp 10, 562, 2007
小鼠小鼠NeurosperesPDS kit: per instructionsDMEM/F12Klein C, Butt SJ, Machold RP, Johnson JE, and Fishell G.: Cerebellum- and forebrain-derived stem cells possess intrinsic regional character, Development132, 4497, 2005
小鼠小鼠, 1 天Neural progenitorPDS kit: per instructionssee referenceSeaberg, R., Smukler, S. and Van der Kooy, D.: Intrinsic Differences Distinguish Transiently Neurogenic Progenitors from Neural Stem Cells in the Early Postnatal Brain., Dev Biol 278, 71, 2005
小鼠小鼠Granule cell precursors, pre-neoplastic and tumor cellsPapain: 10 u/mlNeurobasal/B27Oliver, T., Read, T., Kessler, J., Mehmeti, A., Wells, J., Huynh, T., Lin, S. and Wechsler-Reya, R.: Loss of Patched and Disruption of Granule Cell Development in a Pre-Neoplastic Stage of Medulloblastoma., Development 132, 2425, 2005
Deoxyribonuclease I: 250 u/ml
小鼠小鼠Cortical neuronsPDS kit: per instructionsNeurobasalHernandez, F., Perez, M., Lucas, J., Mata, A., Bhat, R. and Avila, J.: Glycogen Synthase Kinase-3 plays a Crucial Role in Tau Exon 10 Splicing and Intranuclear Distribution of SC35. Implications for Alzheimer's Disease., J Biol Chem 279, 3801, 2004
小鼠小鼠, 3 天MicrogliaPapain: 90 u/mlEagle's MEMNishioku T, Hashimoto K, Yamashita K, Liou SY, Kagamiishi Y, Maegawa H, Katsube N, Peters C, von Figura K, Saftig P, Katunuma N, Yamamoto K, Nakanishi H: Involvement of cathepsin E in exogenous antigen processing in primary cultured murine microglia, J Biol Chem 277, 4816, 2002
Deoxyribonuclease I: 2000 u/ml
小鼠小鼠, SD, 8-12 周MicrogliaTrypsin: 0.125%RPMI-1640O'Donnell SL, Frederick TJ, Krady JK, Vannucci SJ, Wood TL: IGF-I and microglia/macrophage proliferation in the ischemic mouse brain, Glia 39, 85, 2002
Collagenase Type 2: 0.01%
Deoxyribonuclease I: .005%
小鼠小鼠, 2-5天Postnal substantia nigraPDS kit: per instructionssee referenceSmeyne Michelle, Smeyne RichardJ: Method for culturing postnatal substantia nigra as an in vitro model of experimental Parkinson's disease, Brain Res Brain Res Protoc 9, 105-11, 2002
小鼠小鼠, 胚胎Cortical progenitorsPDS kit: per instructionsSerum free mediumEstivill-Torrus, G., Pearson, H., Van Heyningen, V., Price, D. and Rashbass, P.:Pax6 is Required to Regulate the Cell Cycle and the Rate of Progression from Symmetrical to Asymmetrical Division in Mammalian Cortical Progenitors.,Development 129, 455, 2002
小鼠小鼠, 1 天Neurons and gliaPDS kit: per instructionsNeurobasalMartin-Aparicio, E., Yamamoto, A., Hernandez, F., Hen, R., Avila, J. and Lucas, J.: Proteasomal-Dependent Aggregate Reversal and Absence of Cell Death in a Conditional Mouse Model of Huntington's Disease., J Neurosci 21, 8772, 2001
小鼠小鼠Cerebellar granule cell precursorsPapain: 0.435%EBSSMiyazawa K, Himi T, Garcia V, Yamagishi H, Sato S, and Ishizaki Y.: A role for p27/Kip1 in the control of cerebellar granule cell precursor proliferation, J Neurosci 20, 5756, 2000
Deoxyribonuclease I: 0.05%
小鼠小鼠AstrocytesTrypsin: 0.25%DMEMLim, D, and Alvarez-Buylla, A.: Interaction Between Astrocytes and 成年的 Subventricular Zone Precursors Stimulates Neurogenesis, Proc Natl Acad Sci U S A 96, 7526, 1999
小鼠小鼠, 初生的Hippocampal cellsPapain: 10 u/mlDMKMJun K, Choi G, Yang SG, Choi KY, Kim H, Chan GC, Storm DR, Albert C, Mayr GW, Lee CJ, Shin HS: Enhanced hippocampal CA1 LTP but normal spatial learning in inositol 1,4,5-trisphosphate 3-kinase(A)-deficient mice, Learn Mem 5, 317-30, 1998
小鼠小鼠, SWR or CF1, 1-3 個月Papillae, taste receptorPronase E: 0.15%Carbonate-Phosphate bufferSpielman, A., Mody, I., Brand, J., Whitney, G., MacDonald, J., and Salter, M.: A Method for Isolating and Patch-Clamping Single Mammalian Taste Receptor Cells,Brain Res 503, 326, 1989
(see reference)
小鼠小鼠, 0-30 天NeuralTrypsin NF 1:250: 50 0.25%BSSShrier, B., Wilson, S., and Nirenberg, M.: Cultured Cell Systems and Methods for Neurobiology, Vol. 32,, , 765, 1974
綿羊羔羊OligodendrogliaTrypsin: 0.1%(see reference)Poduslo, S., Miller, K., and McKhann, G.: Metabolic Properties of Maintained Oligodendroglia Purified from Brain, J Biol Chem 253, 1592, 1978
(還有 牛犢)Neural
小型豬, 尤卡坦半島 (尤卡坦半島野豬), 4-6 個月MicrovascularCollagenase: 0.1%HBSSRobinson, D.H., Kang,Y., Deschner, S.H., and Nielsen, T.B.: Morphologic Plasticity and Periodicity : Porcine Cerebral Microvascular Cells in Culture, In Vitro Cell Dev Biol 26, 169, 1990
大鼠大鼠, SD, 19-21 天Suprachiasmatic nucleus neuronsPapain: 100 u/mlMEMCao, R., Li, A., Cho, H., Lee, B. and Obrietan, K.: Mammalian Target of Rapamycin Signaling Modulates Photic Entrainment of the Suprachiasmatic Circadian Clock., J Neurosci 30, 6302, 2010
大鼠大鼠, 食魚動物, 7-21 個月Hippocampal neuronsPapain: 0.2%Hibernate AChen, N., Newcomb, J., Garbuzova-Davis, S., Davis Sanberg, C., Sanberg, P. and Willing, A.: Human Umbilical Cord Blood Cells Have Trophic Effects on Young and Aging Hippocampal Neurons in Vitro., Aging Dis 1, 173, 2010
大鼠大鼠, SD, 7 天Cerebellar granule neuronsPDS kit: per instructionsPBSTanaka, S., Shaikh, I., Chiocca, E. and Saeki, Y.: The Gs-Linked Receptor GPR3 Inhibits the Proliferation of Cerebellar Granule Cells During Postnatal Development., PLoS ONE 4, e5922, 2009
大鼠大鼠, neonatalAstrocytesPapain: 20 u/mlEBSSShigetomi, E. and Khakh, B.: Measuring Near Plasma Membrane and Global Intracellular Calcium Dynamics in Astrocytes., J Vis Exp 26, 1142, 2009
大鼠大鼠,初生的Hippocampal neuronsPapain: 10 u/mlEBSSRichler Esther, Chaumont Severine, Shigetomi Eiji, Sagasti Alvaro, Khakh Baljit S: Tracking transmitter-gated P2X cation channel activation in vitro and in vivo,Nat Methods 5, 87-93, 2008
大鼠大鼠, SDHippocampalTrypsin: 0.1%NeurobasalAkanda, N., Tofighi, R., Brask, J., Tamm, C., Elinder, F. and Ceccali, S.:Voltage-Dependent Anion Channels (VDAC) in the Plasma Membrane Play a Critical Role in Apoptosis in Differentiated Hippocampal Neurons but not in Neural Stem Cells., Cell Cycle 7, 3225, 2008
大鼠大鼠, neonatalDura materCollagenase Type 1: 0.075%DMEMPeptan, I., Hong, L. and Evans, C.: Multiple Differentiation Potentials of Neonatal Dura Mater-Derived Cells., Neurosurgery 60, 346, 2007
大鼠大鼠, E18Hippocampal neuronsPapain: 0.2%HibernateJekabsons MB, Nicholls DG: Bioenergetic analysis of cerebellar granule neurons undergoing apoptosis by potassium/serum deprivation, Cell Death Differ 13, 1595-610, 2006
大鼠大鼠, 威斯塔, 1-3 dayHippocampal neuronsTrypsin: 0.05%DMEMVelasco Myrian, Garci璦 Esperanza, Onetti Carlos G: Glucose deprivation activates diversity of potassium channels in cultured rat hippocampal neurons,Cell Mol Neurobiol 26, 307-19, 2006
大鼠大鼠, E19Hippocampal neuronPapain: 10 u/mlMEMKhakh Baljit S, Fisher James A, Nashmi Raad, Bowser David N, Lester Henry A:An angstrom scale interaction between plasma membrane ATP-gated P2X2 and alpha4beta2 nicotinic channels measured with fluorescence resonance energy transfer and total internal reflection fluorescence microscopy, J Neurosci 25, 6911-20, 2005
大鼠大鼠, 威斯塔, 14天Visual corticalPDS kit: per instructionsEBSSMizoguchi Y, Kanematsu T, Hirata M, Nabekura J: A rapid increase in the total number of cell surface functional GABAA receptors induced by brain-derived neurotrophic factor in rat visual cortex, J Biol Chem 278, 44097, 2003
大鼠大鼠, 威斯塔, 雄性Cerebral endothelialCollagenase Type 3: 0.2%MEMFloris S, Van den Born J, van der Pol SM, Dijkstra CD, De Vries HE: Heparan sulfate proteoglycans modulate monocyte migration across cerebral endothelium, J Neuropathol Exp Neurol 62, 780, 2003
大鼠大鼠, SD, E18Cortical cellsPapain: 20 u/mlEBSSBehar, T, Smith, S, Kennedy, R, Mckenzie, J, Maric, I and Barker, J: GABA(B) receptors mediate motility signals for migrating embryonic cortical cells, Cereb Cortex 11, 744-53, 2001
Deoxyribonuclease I: .005%
大鼠大鼠, 威斯塔, 250-300 gCerebral artery smooth muscle cellsPapain: 1.5 mg/mlPhysiological Salt SolutionBrzezinska AK, Gebremedhin D, Chilian WM, Kalyanaraman B, Elliott SJ.:Peroxynitrite reversibly inhibits Ca(2+)-activated K(+) channels in rat cerebral artery smooth muscle cells, Am J Physiol Heart Circ Physiol 278, H1883, 2000
Collagenase Type 4: 1.5 mg/ml
大鼠大鼠, SD, E16Cortical neuronsPDS kit: with modificationsNeurobasal MediumVarney MA, Cosford ND, Jachec C, Rao SP, Sacaan A, Lin FF, Bleicher L, Santori EM, Flor PJ, Allgeier H, Gasparini F, Kuhn R, Hess SD, Velicelebi G, Johnson EC:SIB-1757 and SIB-1893: selective, noncompetitive antagonists of metabotropic glutamate receptor type 5, J Pharmacol Exp Ther 290, 170, 1999
大鼠大鼠, 威斯塔, 初生的Hippocampal cellsPapain: 1 mg/mlDMEMBoehm S, Betz H: Somatostatin inhibits excitatory transmission at rat hippocampal synapses via presynaptic receptors, J Neurosci 17, 4066, 1997
大鼠大鼠, SD, 食魚動物Hippocampal neuronsPapain: 0.2%HibernateA/B27Brewer, G.J.: Isolation and culture of 成年的 rat hippocampal neurons of any age, J Neurosci Methods 71, 143, 1997
大鼠大鼠, E18Hippocampal and cortical neuronsPDS kit: per instructionsNeurobasal mediaNaeve GS, Ramakrishnan M, Kramer R, Hevroni D, Citri Y, Theill LE: Neuritin: a gene induced by neural activity and neurotrophins that promotes neuritogenesis,Proc Natl Acad Sci U S A 94, 2648-53, 1997
大鼠大鼠, SD, 初生GlialTrypsin: 0.0625%MEM, sterilePixley, S.K.: The Olfactory Nerve Contains Two Populations of Glia, In Vitro 5, 269, 1992
大鼠大鼠, 初生AstrocytesTrypsin: 0.25%DMEM, HBSSHolzwarth, J., Glaum, S., and Miller, R.: Activation of Endothelin Receptors by Sarafotoxin Regulates Ca2+ Homeostasis in Cerebellar Astrocytes, Glia 5, 239, 1992
大鼠大鼠, 60-72 小時大的FibroblastsTrypsin: 0.2%HEPES buffered DMEMAcheson, A., Barker, P., Alderson, R., Miller, F., and Murphy, R.: Detection of Brain-Derived Neurotrophic Factor-like Activity in Fibroblasts and Schwann Cells: Inhibition by Antibodies to NGF, Neuron 7, 265, 1991
大鼠大鼠, SD, 成年的EndothelialCollagenase Type 2: 0.5%Medium 199Doron, D., Jacobowitz, D., Heldman, E., Feurerstein, G., Pollard, H., and Hallenbeck, J.: Extracellular Matrix Permits the Expression of Von Willebrand's Factor, Uptake of Di-I-Acetylated Low Density Lipoprotein and Secretion of Prostacyclin in Cultures of Endothelial Cells from Rat Brain Microvessels, In Vitro Cell Dev Biol 27A, 689, 1991
大鼠大鼠, SD, 5天Hippocampal neuronsTrypsin: 0.2%HBSSMattson, M., and Kater, S.: Development and Selective Neurodegeneration in Cell Cultures From Different Hippocampal Regions, Brain Res 490, 110, 1989
Deoxyribonuclease I: 10 ug/ml
大鼠大鼠, SD, 雌性Fetal rat brainCollagenase Type 4: 0.1%DMEMMatsuda, M.: Serum Proteins Enhance Aggregate Formation of Dissociated Fetal Rat Brain Cells in an Aggregating Culture, In Vitro Cell Dev Biol 24 (10), 1031, 1988
大鼠大鼠, 白化病, 成年的 和初生的Cerebral corticesTrypsin: 0.25%PBSGiulian, D. and Baker, T.J.: Characterization of Ameboid Microglia Isolated From Developing Mammalian Brain, J Neurosci 6, 2163, 1986
大鼠大鼠, 威斯塔, 初生Germinal matrixTrypsin: 0.25%HBSSGoldman, J.E., Geier, S.S., and Hirano, M.: Differentiation of Astrocytes and Oligodendrocytes From Germinal Matrix Cells in Primary Culture, J Neurosci 6, 52, 1986
大鼠大鼠,胎兒, 18-20天Hippocampal neuronsTrypsin: 0.25%HBSS, CMFBartlett, W. and Banker, G.: An Electron Microscopic Study of the Development of Axons and Dendrites by Hippocampal Neurons in Culture. I. Cells Which Develop Without Intercellular Contacts, J Neurosci 4, 1944, 1984
大鼠大鼠, 胎兒, 18 天HippocampiTrypsin: 0.1%HBSSRothman, S.: Synaptic Release of Excitatory Amino Acid Neurotransmitter Mediates Anoxic Neuronal Death, J Neurosci 4 (7), 1884, 1984
大鼠大鼠, SD,  懷孕19-20天的NeuralTrypsin: 0.25%DMEMAhmed, Z., Walker, P., and Fellows, R.: Properties of Neurons from Dissociated Fetal Rat Brain in Serum-Free Culture, J Neurosci 3 (12), 2448, 1983
大鼠大鼠, SD, 胎兒Cerebral cortexDeoxyribonuclease I: 0.001%HEPESPeterfreund, R. and Vale, W.: High Molecular Weight Somatostatin Secretion by Cultured Rat Brain Cell, Brain Res 239, 463, 1982
Hypothalmus
大鼠Wistar京都大鼠, 雄性, 100 - 200 克EndothelialCollagenase Type 2: 0.05%HBSSDiglio, C.A., Grammas, P., Filiberto Giacomelli, M.S., and Wiener, J.: Primary Culture of Rat Cerebral Microvascular Endothelial Cells, Lab Invest 46, 554, 1982
Cerebral
大鼠大鼠, 胎兒CorticalTrypsin: 0.25%Puck's D1 (see reference)Swaiman, K., Neale, E., Fitzgerald, S., and Nelson, P.: A Method for Large-scale Production of Mouse Brain Cortical Cultures, Brain Res 255, 361, 1982
大鼠大鼠, 威斯塔,懷孕的GlialTrypsin: 0.05%Eagle's MEM/DMEMAbney, E., Bartlett, P., and Raff, M.: Astrocytes, Ependymal Cells, and Oligodendrocytes Develop on Schedule in Dissociated Cell Cultures of Embryonic Rat Brain, Dev Biol 83, 301, 1981
大鼠大鼠, SD, 一個月大的Capillary endotheliumNeutral Protease: 0.1%Medium 199Bowman, P., Betz, A., Ar, D., Wolinsky, J., Penney, J., Shivers, R., and Goldstein, G.: Primary Culture of Capillary Endothelium From Rat Brain, In Vitro 17 (4), 353, 1981
Pericytes
大鼠大鼠, 威斯塔, 雄性, 300-500 克MicrovesselsCollagenase Type 2: 0.75%Ringers-HEPES bufferWilliams, S., Gillis, J., Matthews, M., Wagner, R., and Bitensky, M.: Isolation and Characterization of Brain Endothelial Cells: Morphology and Enzyme Activity, J Neurochem 35 (2), 374, 1980
Endothelial
大鼠大鼠, 威斯塔, 成年的, 170克EndothelialTrypsin: 0.5%BSSPhillips, P., Kumar, P., Kumar, S., and Waghe, M.: Isolation And Characterization of Endothelial Cells From Rat And Cow Brain White Matter, J Anat 129, 261, 1979
大鼠大鼠, 豪斯曼, 18 天Hippocampal neuronsTrypsin: 0.1%HBSSBanker, G., and Cowan, M.: Rat Hippocampal Neurons in Dispersed Cell Culture,Brain Res 126, 397, 1977
大鼠大鼠, SD, 2 天PinealTrypsin: 0.25%DMEM, MEMRowe, V., Neale, E., Avins, L., Guroff, G., and Schrier, B.: Pineal gland cells in culture. Morphology, Biochemistry, Differentiation, and co-culture with sympathetic neurons, Exp Cell Res 104, 345, 1977
貝類動物旋節(jié)螺trivolvisNeuronsTrypsin: 0.2%Saline, SterileHadley, R.D., Bodnar, D.A., and Kater, S.B.: Formation of Electrical Synapses Between Isolated, Cultured Helisoma Neurons Requires Mutual Neurite Elongation,J Neurosci 5, 3145, 1985
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