qa-bio E-RPNG01 – 60說明書
Elizabethkingia miricola的重組PNGase F
查看產品文檔：
Specsheet CofA SDS
部件號–酶的數量
E-RPNG01 – 60 µLs¹
E-RPNG01-20 – 20 µl¹
E-RPNG01-200 – 200 µls²¹僅
包含緩沖液，變性劑，Triton-
X²僅包含酶
PNGase F，肽N糖苷酶F，N-糖苷酶，N-糖苷酶
從含有Elizabethkingia miricola基因克隆的大腸桿菌菌株中分離重組PNGaseF。與天然酶（E-PNG01）相比，重組酶的活性或比活性沒有可檢測的差異。
PNGase F從糖蛋白上裂解天冬酰胺連接的（N連接的）寡糖。PNGase F將天冬酰胺脫氨為天冬氨酸，使寡糖保持完整。變性可將裂解速率提高至100倍。大多數天然蛋白質仍然可以*被N-去糖基化，但是必須增加孵育時間。PNGase F在孵育條件下將保持活性至少72小時。PNGase F不會去除通常在植物糖蛋白上發(fā)現的含有Alpha-（1,3）連接的核心巖藻糖的寡糖；為此，請使用肽N-糖苷酶A。
PNGase F在大腸桿菌中來自伊麗莎白的源重組PNGase F基因
EC 3.5.1.52
內容
60的重組PNG酶F（0.3 U）在20mM的Tris-HCl微升等分試樣，pH 7.5中
包含用20μL和60μL包尺寸
5倍PNG酶?F反應緩沖液7.5 PNG酶的F - 250 mM磷酸鈉，pH 7.5中
PNG酶?F變性解決方案– 2％SDS，1 M Beta-巰基乙醇
PNGase F Triton X-100 – 15％解決方案
比活度> 25 U / mg
活性5 U / ml
分子量35,000道爾頓
PNGase F 6-10的pH范圍，最佳7.5
PNGase F建議用法
1.在Eppendorf管中加入200 µg糖蛋白。用去離子水將最終體積調整為35 µl。
2.加入10 µl 5x PNGase F反應緩沖液7.5和2.5 µl PNGase F變性溶液。在100°C加熱5分鐘。
3.酷。加入2.5 µl PNGase F Triton X-100并混合。
4.在反應中加入2.0 µl PNGaseF。在37°C下孵育3小時。
特異性PNGase F從糖蛋白上裂解天冬酰胺連接的（N連接的）寡糖。PNGase F將天冬酰胺脫氨為天冬氨酸，使寡糖保持完整。變性可將裂解速率提高至100倍。大多數天然蛋白質仍然可以*被N-去糖基化，但是必須增加孵育時間。PNGase F在孵育條件下將保持活性至少72小時。PNGase F不會去除通常在植物糖蛋白上發(fā)現的含有Alpha-（1,3）連接的核心巖藻糖的寡糖；為此，請使用肽N-糖苷酶A。
比活性定義為在37°C，pH 7.5的情況下，在1分鐘內催化從1微摩爾RNase B釋放N-連接的寡糖所需的酶量。通過SDS-PAGE監(jiān)測切割（切割的RNase B遷移更快）。
儲存將酶保存在4?C下??。
