genovis FabRICATOR® Enzyme說(shuō)明書(shū)
FabRICATOR酶以凍干粉形式提供，不添加任何防腐劑，并且有2000瓶和5000單位瓶裝，可消化2至5 mg IgG。
Fabricator（IdeS）是一種半胱氨酸蛋白酶，可在鉸鏈下方的特定位點(diǎn)消化抗體，孵育30分鐘后會(huì)產(chǎn)生F（ab'）2和Fc / 2片段的均質(zhì)庫(kù)。
Fabricator（IdeS）是一種*的酶，可在鉸鏈區(qū)下方的特定位點(diǎn)消化IgG，從而生成F（ab'）2和Fc / 2片段的均質(zhì)庫(kù)。除IgG外，沒(méi)有其他已知的底物。IgG會(huì)在30分鐘內(nèi)被消化，如果延長(zhǎng)孵育時(shí)間，則不會(huì)存在消化過(guò)度的風(fēng)險(xiǎn)。由于FabRICATOR在生理反應(yīng)條件下消化IgG，因此可以保留免疫反應(yīng)性。在37°C時(shí)可獲得佳活性，但也可在室溫下使用延長(zhǎng)的反應(yīng)時(shí)間進(jìn)行消化。
Fabricator消化人類的所有亞類，以及猴子，兔子和綿羊IgG的某些類。它對(duì)小鼠IgG2a和IgG3的活性有限-對(duì)于這些抗體種類的消化，我們建議使用FabRICATORZ。
使用FabRICATOR消化IgG，然后還原，可產(chǎn)生三個(gè)25 kDa大小的片段（Fd'，F(xiàn)c和LC），可以使用LC-MS儀器輕松對(duì)其進(jìn)行分析。高精度質(zhì)量概況能夠檢測(cè)抗體微變體，例如糖基化，C端賴氨酸鉗制，氧化和脫酰胺等。
FabRICATOR從化膿性鏈球菌克隆 并在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有His標(biāo)簽，分子量為37 725 Da。FabRICATOR是IdeS的重組修飾形式，由Genovis AB開(kāi)發(fā)，用于要求高標(biāo)準(zhǔn)和一致性的生物技術(shù)應(yīng)用。
將FabRICATOR酶凍干并通過(guò)添加水進(jìn)行重構(gòu)。重構(gòu)后，F(xiàn)abricator在+ 4-8°C穩(wěn)定1個(gè)月。該產(chǎn)品在室溫下運(yùn)輸，到達(dá)時(shí)應(yīng)儲(chǔ)存在-20°C下。
已測(cè)試以下緩沖液與FabRICATOR消化在不同pH值下的相容性。注意，在pH 5.0以下，F(xiàn)abricator酶不可逆地失活。pH 8.0以上的消化需要延長(zhǎng)/優(yōu)化的條件。
在10 mM磷酸鈉，137 mM NaCl，2.7mM KCl pH 7.4中于37°C孵育30分鐘后，一個(gè)單位可消化≥95％的1µg人IgG。
