迄今為止，蛋白質(zhì)表達(dá)的發(fā)展主要集中在改進(jìn)產(chǎn)生重組克隆和增加蛋白質(zhì)生產(chǎn)水平的便利性上。我們開(kāi)發(fā)了ProFold™，這是一個(gè)可在高等真核系統(tǒng)中促進(jìn)蛋白質(zhì)折疊的市售載體。ProFold™載體的主要優(yōu)勢(shì)是在細(xì)胞質(zhì)或ER中分子伴侶的過(guò)度表達(dá)，這有助于折疊目標(biāo)蛋白質(zhì)。我們已經(jīng)用哺乳動(dòng)物，酵母和植物蛋白測(cè)試了我們的載體，并觀(guān)察到與使用常規(guī)桿狀病毒載體或大腸桿菌表達(dá)的相同蛋白相比，生物活性蛋白的產(chǎn)量有了顯著提高。觀(guān)察到目標(biāo)蛋白表達(dá)和生物活性的顯著改善多分子伴侶系統(tǒng)，專(zhuān)門(mén)用于折疊Hsp90依賴(lài)性蛋白。

ProFold™載體的另一個(gè)優(yōu)勢(shì)是通過(guò)綠色熒光可以方便地優(yōu)化蛋白質(zhì)表達(dá)系統(tǒng)。ProFold™載體可表達(dá)維多利亞水母綠色熒光蛋白（GFP）。這樣可以監(jiān)控病毒的傳播，優(yōu)化培養(yǎng)條件并通過(guò)“末端綠色稀釋”來(lái)滴定病毒原種。節(jié)省時(shí)間和精力；無(wú)需昂貴的桿狀病毒滴定套件或設(shè)備。需要的基本部件是相同的365 nm紫外線(xiàn)透射燈和數(shù)碼相機(jī)，通常用于溴化乙錠染色的凝膠。此外，您可以使用熒光顯微鏡計(jì)數(shù)受感染細(xì)胞的綠色病灶或利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行計(jì)數(shù)。

abvector ProGreen產(chǎn)品 

ProGreen™桿狀病毒基因組載體DNA編碼維多利亞水母綠色熒光蛋白（GFP）圖1。GFP可以監(jiān)控重組病毒的繁殖，優(yōu)化培養(yǎng)條件，并通過(guò)“末端綠色稀釋”來(lái)滴定病毒原種。多角體蛋白位點(diǎn)保留用于在強(qiáng)多角體蛋白啟動(dòng)子控制下插入靶基因。初，多角體蛋白位點(diǎn)被大腸桿菌 β-半乳糖苷酶基因占據(jù)。為了允許插入靶基因，使用Bsu36.I限制性核酸內(nèi)切酶從桿狀病毒DNA中去除了β-半乳糖苷酶基因，該酶在多角體蛋白啟動(dòng)子的下游，β-半乳糖苷酶基因和下游必需基因ORF 1629中進(jìn)行切割。
	圖1. ProGreen™DNA的示意圖?；騁FP由綠色箭頭指示。多面體啟動(dòng)子由黑色三角形表示。 大腸桿菌 β-半乳糖苷酶基因初存在于多角體蛋白位點(diǎn)中。但是，在市售的ProGreen™載體中，它與必需基因的一部分一起被去除，以允許用β-半乳糖苷酶基因替代感興趣的基因（靶基因），更多信息請(qǐng)參考TECHNOLOGY。 ProGreen™可以驅(qū)動(dòng)目標(biāo)蛋白質(zhì)的合成速率，該速率接近重組桿狀病毒系統(tǒng)中針對(duì)具體目標(biāo)蛋白質(zhì)所能達(dá)到的大速率，同時(shí)可以高水平表達(dá)GFP（圖2）。 大腸桿菌β-半乳糖苷酶（β-gal）在多角體蛋白位點(diǎn)中表達(dá)為靶蛋白，以便充分比較ProGreen™和常規(guī)載體BacPAK6™之間靶蛋白的合成速率。如圖2所示，兩種載體都將靶蛋白（β-gal）表達(dá)到大約相同的高水平，而ProGreen™也表達(dá)GFP。
	圖2.感染了基于BacPAK6™和基于ProGreen™的重組桿狀病毒的昆蟲(chóng)細(xì)胞的蛋白質(zhì)表達(dá)譜，這些桿狀病毒在多角體蛋白啟動(dòng)子的控制下在多角體蛋白位點(diǎn)表達(dá)大腸桿菌 β-半乳糖苷酶（β-gal）。 用重組桿狀病毒以每細(xì)胞5個(gè)噬斑形成單位感染重組夜蛾 Sf9細(xì)胞，并在感染后60小時(shí)收獲。在50 mM Tris-HCl pH 8.0、150 mM EDTA，0.5％NP-40中裂解細(xì)胞，并將裂解液以30,000g離心15分鐘。β-半乳糖苷酶和GFP高度可溶，幾乎僅在上清液中發(fā)現(xiàn)。上清液蛋白在11％SDS-PAGE中分離，并用考馬斯亮蘭染色。
	方法。 轉(zhuǎn)到桿狀病毒教程，以獲取簡(jiǎn)單的分步操作說(shuō)明。有關(guān)概念性細(xì)節(jié)，請(qǐng)參閱技術(shù)。如果您已經(jīng)對(duì)這些載體有經(jīng)驗(yàn)，則可以使用與BaculoGold™（BD Pharmingen）相同的方法。 推薦的質(zhì)粒轉(zhuǎn)移載體。如下圖3所示，大量的質(zhì)粒與ProGreen™載體兼容，可滿(mǎn)足各種蛋白質(zhì)表達(dá)和純化要求。我們提供可以提供高效信號(hào)序列的載體（pAB-bee™，pAB-bee™-8xHis，pAB -bee-FH™質(zhì)粒轉(zhuǎn)移載體）以促進(jìn)分泌蛋白和膜蛋白的表達(dá)。靶蛋白可以使用 GST，His，GFP，MBP或雙重His / MBP或FLAG / His標(biāo)簽表達(dá)，或使用pVL1393質(zhì)粒載體表達(dá)而無(wú)需標(biāo)簽。使用pAcAB3載體可以表達(dá)多達(dá)3種靶蛋白，該載體也與ProGreen™-C1和-C2載體兼容。您也可以使用與BacPAK6™或BaculoGold™載體兼容的任何質(zhì)粒轉(zhuǎn)移載體。
	pVL1393，目錄號(hào) ＃B1 pAB-GST™，目錄 ＃B5 pAB-6xHis™，產(chǎn)品目錄。＃B4 pVL-FH，目錄號(hào) ＃B9 pAB-6xHis-MBP™，目錄 ＃B7 pAB-MBP™，目錄 ＃B6 pVL-GFP TM，目錄號(hào)。＃B8 pAB-bee，目錄號(hào)。＃B3 pAB-bee™-8xHis，產(chǎn)品目錄 ＃B3H pAB-bee-FH™，產(chǎn)品目錄 ＃B3FH pAB-bee，目錄號(hào)。＃B3       ProGreen™，產(chǎn)品目錄。＃A1
	圖3.與ProGreen™桿狀病毒載體DNA相容的質(zhì)粒轉(zhuǎn)移載體的示意圖。所有質(zhì)粒轉(zhuǎn)移載體都具有允許質(zhì)粒在大腸桿菌中繁殖的相同質(zhì)粒“主鏈” （由藍(lán)色雙線(xiàn)表示），但它們?cè)诙嗝骟w蛋白啟動(dòng)子下游部分（由黑色三角形表示）不同。有關(guān)概念性細(xì)節(jié)，請(qǐng)參閱技術(shù)。單擊質(zhì)粒名稱(chēng)以獲取有關(guān)每個(gè)質(zhì)粒的詳細(xì)信息。單擊Cat＃進(jìn)行定價(jià)和訂購(gòu)。
	表1.與ProGreen™兼容的其他供應(yīng)商的質(zhì)粒轉(zhuǎn)移載體。
	諾瓦根 法明根 OET 克隆泰克 pTriEx™-1.1  pTriEx™-1.1 Hygro  pTriEx™-1.1 Neo  pTriEx™-2  pTriEx™-2 Hygro  pTriEx™-2 Neo  pTriEx™-3  pTriEx™-3 Hygro  pTriEx™-3 Neo  pTriEx™-4  pTriEx™-4 Hygro  pTriEx™-4 Neo  pTriEx™-4 Ek / LIC pBAC™-1  pBACgus™-1  pBAC™-2cp  pBACgus™-2cp  pBAC™-3  pBACgus™-3  pBAC4x™-1  pBACgus4x™-1  pBAC™-5  pBACgus™-5  pBAC™-6  pBACgus™-6  pBACsurf™ -1 BaculoGold™pAcGHLT-A  BaculoGold™pAcGHLT-B  BaculoGold™pAcGHLT-C  BaculoGold™pAcGP67A  BaculoGold™pAcGP67B  BaculoGold™pAcGP67C  pVL1392-XylE pOET™1-5  pOET™2  pOET™1C_6xHis  pOET™2C_6xHis  pOET™1N_6xHis  pOET™2N / C_6xHis BacPAK™8  BacPAK™9  BAcPAK™8-gus
	如果您尚未使用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)（也稱(chēng)為桿狀病毒表達(dá)載體系統(tǒng)或BEVS）工作，可以在TECHNOLOGY上進(jìn)行快速更新。有關(guān)桿狀病毒轉(zhuǎn)染，重組桿狀病毒的繁殖和重組桿狀病毒蛋白表達(dá)研究的簡(jiǎn)單在線(xiàn)說(shuō)明，請(qǐng)轉(zhuǎn)到桿狀病毒教程。