pCAG-GBP7-p65AD與pCAG-Gal4DBD-GBP2一起用于激活表達GFP的細胞中UAS調(diào)控的基因。該載體允許交換與該載體中GBP7的C-末端融合的激活域（AD）或其他蛋白質(zhì)。
綠色熒光蛋白（GFP）及其衍生物是跨模型生物的基因表達的常用標記。值得注意的是，在小鼠中，已經(jīng)產(chǎn)生了成千上萬個轉(zhuǎn)基因GFP系。這些試劑揭示了許多基因的表達模式，并用作標記特定細胞類型的試劑。為了擴展轉(zhuǎn)基因GFP系的效用，使人們可以使用GFP直接操縱GFP標記的細胞類型中的任何所需基因，我們開發(fā)了一種合成系統(tǒng)，該系統(tǒng)使用GFP作為支架蛋白來誘導(dǎo)雜交轉(zhuǎn)錄因子的形成。GFP的識別是由GFP結(jié)合蛋白（GBP）介導(dǎo)的，該蛋白是來源于駱駝科動物抗體的單鏈GFP結(jié)合域。特定的GBP對能夠?qū)⑺┫档腄NA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（DBD）和激活結(jié)構(gòu)域（AD）整合到GFP支架上。然后，這種復(fù)合物可以觸發(fā)任何由上游激活序列（UAS）調(diào)控的基因的誘導(dǎo)。
技術(shù)指標
| 產(chǎn)品類別： | 質(zhì)粒 |
| 基因/插入名稱： | GBP7-p65反式激活結(jié)構(gòu)域（AD）融合蛋白 |
| 抗生素耐藥性： | 氨芐西林 |
| 格式： | 液體 |
| 經(jīng)測試的應(yīng)用程序： | GFP依賴性轉(zhuǎn)錄因子成分在哺乳動物細胞中的表達。有關(guān)協(xié)議，請參見：Tang JC等。細胞。2013年8月15日； 154（4）：928-39。 |
| 在37°C的大腸桿菌中生長： | 是 |
| 克隆位點5'： | 年齡 |
| 克隆位點3'： | 通知 |
| 5'測序引物： | GGACTTCCTTTGTCCCAAATCTG |
| 3'測序引物： | TAGCCAGAAGTCAGATGCTC |
| 插入尺寸： | 1017個基點 |
| 矢量骨干和大?。?/td> | pCAG-GFP，4823 |
| 高或低副本： | 高 |
| 發(fā)起人： | CAG |
| 存儲： | 凍干的DNA在室溫下無限期穩(wěn)定，重構(gòu)的DNA短期儲存在4度，長期儲存在-20度。 |
| 發(fā)貨： | 環(huán)境溫度 |
文獻資料
pCAG-GBP7-p65AD是哺乳動物表達載體，旨在表達GFP依賴性轉(zhuǎn)錄因子的激活域（AD）部分。具體而言，p65 AD連接到GBP7的C末端。來自SV40大T抗原的核定位信號被添加到融合蛋白的N末端。融合蛋白的轉(zhuǎn)錄由早期CMV增強子/β-肌動蛋白啟動子驅(qū)動，并由兔β-球蛋白聚腺苷酸化信號終止。將Kozak共有序列（GCCACC）直接放在起始ATG的前面，以提高翻譯效率。質(zhì)粒中的氨芐青霉素抗性基因允許在大腸桿菌中進行選擇。SV40 ori序列使質(zhì)粒能夠在表達SV40大T抗原的細胞（例如293T和COS-7細胞）中游離復(fù)制。
