mypols Volcano3G說(shuō)明書(shū)
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“ myPOLS認(rèn)為，RT-qPCR應(yīng)該與qPCR一樣簡(jiǎn)單。要定量DNA還是RNA模板都沒(méi)有關(guān)系。考慮到這一點(diǎn)，我們開(kāi)發(fā)了Volcano3G RT-PCR主混合物。”
Volcano3G RT-PCR預(yù)混液可通過(guò)快速簡(jiǎn)便的PCR方案擴(kuò)增RNA或DNA靶序列，甚至包括0步擴(kuò)增。
此外，淺藍(lán)色提高了移液步驟中混合物的可見(jiàn)度，尤其是在使用白色或透明孔板時(shí)。
該混合物適用于DNA和RNA模板的qPCR，適用于GreenDye或基于探針的測(cè)定。
所有這些都以可與標(biāo)準(zhǔn)qPCR混合物媲美的高度兼容的價(jià)格提供。
Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix是一種即用型預(yù)混液，可用于所有標(biāo)準(zhǔn)PCR循環(huán)儀中的可靠qPCR和RT-PCR。該混合物包含一種穩(wěn)健的Taq DNA聚合酶和一種具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性的經(jīng)過(guò)工程改造的熱穩(wěn)定DNA聚合酶的酶混合物。它針對(duì)RNA和DNA靶標(biāo)的基于探針的檢測(cè)分析（包括多重PCR）進(jìn)行了優(yōu)化。此預(yù)混液的變體補(bǔ)充了ROX參考染料。它有兩種不同的ROX濃度（高和低）。
Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix也可與ROX參考染料（＃6201）一起使用。對(duì)于不使用探針的PCR檢測(cè)，我們建議使用含有DNA結(jié)合染料的Volcano3G RT-PCR 2x Master Mix。也可以在有或沒(méi)有ROX參考（＃6401，＃6301）的情況下使用。
Volcano3G RT-PCR探針2x預(yù)混液包含熱啟動(dòng)配方的酶混合物，該酶混合物具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性和穩(wěn)定的Taq DNA聚合酶，是一種經(jīng)過(guò)工程改造的熱穩(wěn)定DNA聚合酶。將混合物與超純dNTP和緩沖液成分預(yù)混合，以創(chuàng)建可立即使用的2x預(yù)混液，以利用水解探針對(duì)DNA和RNA靶標(biāo)進(jìn)行可靠的RT-PCR檢測(cè)。
該產(chǎn)品以涼爽包裝出售。建議在抵達(dá)時(shí)將產(chǎn)品存放在-20°C下。
RT-PCR活性：已對(duì) Volcano3G RT-PCR Mix進(jìn)行了成功的RT-PCR性能測(cè)試。在實(shí)時(shí)PCR循環(huán)儀中從人總RNA提取物中擴(kuò)增出151 bp片段（HPRT1 mRNA），并可視化為單個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物。
DNA聚合酶活性：使用人工DNA模板和DNA引物監(jiān)控Volcano3G DNA聚合酶活性并將其調(diào)整為特定的DNA聚合酶活性。
使用Volcano3G RT-PCR預(yù)混液，RT-PCR變得更加容易。Volcano3G RT-PCR預(yù)混液可通過(guò)快速簡(jiǎn)便的PCR方案擴(kuò)增RNA靶序列，甚至包括0步擴(kuò)增。
Volcano3G是性能改進(jìn)的下一代Volcano2G。它為精確，快速的qPCR提供了多種應(yīng)用。它適用于常見(jiàn)的熱循環(huán)方案和直接來(lái)自RNA的“零步長(zhǎng)” RT-PCR方案。如此處所示，通過(guò)使用基于探針的qPCR分析和常見(jiàn)的熱RT-PCR方案，可以在10倍稀釋系列中檢測(cè)到人工HPRT1 mRNA。
Volcano3G顯示了對(duì)多達(dá)500個(gè)總拷貝的mRNA檢測(cè)的改進(jìn)，這與無(wú)模板對(duì)照（NTC）明顯不同。Volcano 3G Master Mix提供的更明亮的熒光信號(hào)使定量分析變得簡(jiǎn)單而精確。Volcano3G RT-PCR混合物比我們的Volcano2G RT-PCR混合物靈敏度高10倍。在這里，Volcano3G RT-PCR 2x Master混合物檢測(cè)到人為HPRT1 mRNA低至500拷貝，其中含有敏感的DNA結(jié)合染料，聚合酶抑制作用可忽略不計(jì)。
具有GreenDye的Volcano3G RT-PCR 2x預(yù)混液適用于高分辨率熔解（HRM）實(shí)驗(yàn)，可讓您快速識(shí)別非特異性擴(kuò)增子，從而在優(yōu)化PCR時(shí)節(jié)省時(shí)間和精力。
