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上海起發(fā)現(xiàn)貨PROGEN PRAAV9說明書

 更新時間:2019-10-28 點擊量:1516

上海起發(fā)為PROGEN的中國代理商,PROGEN公司成立于1983年,總部位于德國海德堡,由海德堡大學(xué)教授聯(lián)合創(chuàng)辦,是德國一家生物公司,也是德國癌癥研究中心的合作伙伴。

PROGEN 主要產(chǎn)品線:

體外診斷領(lǐng)域中細胞生物學(xué)和生物醫(yī)院學(xué)實驗所需要的科研試劑盒抗體。

核心產(chǎn)品主要為:K19抗體的衍生類產(chǎn)品和細胞膠蛋白類抗體等。

 

品牌:PROGEN

貨號:PRAAV9

上海起發(fā)現(xiàn)貨PROGEN PRAAV9說明書

AAV9 Titration ELISA

*的微量滴定板酶免疫測定法,用于定量檢測完整的AAV9 wt病毒體,AAV9重組病毒體或人腺相關(guān)病毒9的已裝配和未裝配的空衣殼。捕獲抗體檢測到未裝配的衣殼蛋白上不存在的構(gòu)象表位。 

貨號: PRAAV9 
數(shù)量:  96次

詳細1*的微量滴定板酶免疫測定法,用于定量人腺相關(guān)病毒9的病毒體和/或組裝的空衣殼。捕獲抗體可檢測未組裝的衣殼蛋白上不存在的構(gòu)象表位。
詳細2試劑盒對照/標準品:凍干的AAV9空衣殼
提供表格試劑盒,12 x 8孔試紙
有可能的使用僅供研究使用

 

腺相關(guān)病毒(AAV)是非致病性的ssDNA病毒,作為基因治療的病毒載體,正在被廣泛研究。該病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)多種分裂和非分裂細胞,顯示長期基因表達,細胞免疫應(yīng)答低。AAV已用于多項臨床試驗(例如FIX,CFTR,帕金森氏病,Canavan?。┲?,顯示沒有嚴重的與載體相關(guān)的不良反應(yīng)。AAV9對于CNS中的應(yīng)用特別有用。 

目前用于表征AAV制劑的方法包括滴定ELISA,實時PCR,DNA點印跡,轉(zhuǎn)導(dǎo)單位測定,感染中心測定,SDS-PAGE或電子顯微鏡。

AAV制劑所含的空衣殼比填充的,具有治療活性的病毒顆粒多10倍。由于完整顆粒和空顆粒均可誘導(dǎo)免疫反應(yīng),因此對于體內(nèi)應(yīng)用而言,確定完整的顆粒滴度至關(guān)重要。

通過PROGEN的AAV9滴定ELISA進行免疫定量分析提供了一種快速,靈敏且可重現(xiàn)的方法,用于滴定完整的AAV9 wt病毒體,AAV9重組病毒體或已組裝且完整的空AAV9衣殼。

ELISA原理:

該測定基于夾心ELISA技術(shù),其中將對組裝的AAV衣殼上的構(gòu)象表位具有特異性的單克隆抗體(mab)涂在板上,并用于從樣品中捕獲AAV顆粒。

捕獲的AAV顆粒的檢測過程分為兩個步驟。

  1. 生物素偶聯(lián)的單克隆抗體與捕獲的AAV顆粒結(jié)合。
  2. 鏈霉親和素過氧化物酶偶聯(lián)物與生物素分子反應(yīng)。底物的添加導(dǎo)致顯色反應(yīng),其與特異性結(jié)合的病毒顆粒的量成比例。

AAV定量方法的比較:

每種常用的量化方法各有利弊:

  • qPCR已被廣泛使用,但存在一些問題,例如樣品制備,引物設(shè)計或PCR效率,這些問題可能導(dǎo)致實驗室間結(jié)果之間的高度差異。
  • 數(shù)字液滴PCR方法克服了qPCR的某些局限性。但是,由于不同的樣品處理方案,實驗室之間仍然可能發(fā)生變化。
  • 如果使用可靠的參考材料,則斑點印跡是一種簡單且定量的方法。然而,它通常受蛋白質(zhì)印跡的線性和動態(tài)范圍的限制。

考慮到上述技術(shù)的實際缺陷,目前常規(guī)的夾心ELISA在實驗室間和實驗室間的變異以及易于使用方面似乎是*的。因此,它代表了可靠和可再現(xiàn)的總rAVV衣殼滴度定量的宜格式。

改組/變異的AAV的使用:

改組/突變的AAV載體的識別取決于受改組/突變影響的特定衣殼區(qū)域。用于PROGEN的AAV ELISA的捕獲抗體結(jié)合特異性的(在某些情況下還定義為良好的構(gòu)象表位)。這些表位是由相應(yīng)的AAV血清型的衣殼組件產(chǎn)生的。ELISA可能識別您的改組/突變的AAV載體的跡象是抗體結(jié)合表位的存在。然而,衣殼蛋白的蛋白質(zhì)序列的變化也可能影響蛋白質(zhì)的構(gòu)象,因此,AAV衣殼上呈現(xiàn)的表位的構(gòu)象。這可能會影響抗體的結(jié)合親和力,并影響基于AAV ELISA試劑盒提供的(非改組)試劑盒對照的效價測定。由于這些屬性在很大程度上取決于所執(zhí)行的特定改組/突變,因此PROGEN無法保證對改組/突變的AAV向量進行成功且的定量。即使改組/突變的AAV衣殼上仍存在抗體結(jié)合表位,也需要針對您的特定AAV載體測試和優(yōu)化您的檢測方法。

PROGEN強烈建議您生產(chǎn)和校準合適的(改組/突變)試劑盒對照品,以確保使用PROGEN ELISA試劑盒可靠地確定滴定的AAV載體的滴度。

有限使用標簽許可:僅研究使用
產(chǎn)品已授權(quán)給PROGEN Biotechnik GmbH。這些產(chǎn)品用于開發(fā),制造和銷售基于購買的產(chǎn)品和/或包括購買的產(chǎn)品的次級產(chǎn)品/衍生物
需要使用基于許可的分許可協(xié)議。

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