myPOLS Biotec正在開發(fā)新一代的DNA聚合酶
用于和可靠的應(yīng)用，例如個性化醫(yī)療，病原體檢測，DNA和RNA診斷，法醫(yī)學(xué)等等。
我們的研發(fā)活動包括：
后但并非不重要：我們所有的酶和混合物都是在康斯坦茨內(nèi)部生產(chǎn)的，并經(jīng)過常規(guī)測試，符合高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
myPOLS Biotec是一家來自康斯坦茨大學(xué)的生物技術(shù)公司，來自Andreas Marx教授的研究小組。憑借我們在高通量DNA聚合酶設(shè)計方面的專業(yè)知識，我們?yōu)槟膽?yīng)用定制酶。
6101S | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix | 100次反應(yīng)á25μl 1 x 1.25毫升 |
＃6101M | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix | 500次反應(yīng)á25μl 5 x 1.25毫升 |
＃6201S | Volcano3G RT-PCR探針2x Master Mix（+ ROX） | 100次反應(yīng)á25μl 1 x 1.25毫升 |
＃6301S | Volcano3G RT-PCR探針2x Master Mix（+ GreenDye） | 100次反應(yīng)á25μl 1 x 1.25毫升 |
＃6401S | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix（+ GreenDye，+ ROX） | 100次反應(yīng)á25μl 1 x 1.25毫升 |
包含所有必需的組分，包括dNTP和優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液，可在所有標(biāo)準(zhǔn)PCR循環(huán)儀中實現(xiàn)成功可靠的實時qPCR和RT-qPCR。包含的酶由我們的*表現(xiàn)，熱啟動配方，工程Taq DNA聚合酶和Volcano3G DNA聚合酶的混合物組成。該混合物被設(shè)計成適合多重PCR，病原體檢測qPCR和各種基于探針的DNA和RNA靶標(biāo)的qPCR。
包含的Volcano3G DNA聚合酶是一種工程化的，極其熱穩(wěn)定的逆轉(zhuǎn)錄酶和組合的DNA聚合酶，通過定向的人工進(jìn)化獲得?；谶m體的DNA聚合酶的熱啟動制劑防止錯誤擴增。高于50°-55°C的溫度會使適體的二級結(jié)構(gòu)熔化并使聚合酶釋放。
應(yīng)用
典型的RT-PCR方案
步 | 溫度 | 時間 |
初始變性步驟 | 80℃下 | 60秒 |
逆轉(zhuǎn)錄步驟* | 50℃下 | 600秒 |
PCR循環(huán)： |
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變性 | 95℃ | 10秒 |
退火/延伸** | 各種* | 50秒（35-50周期） |
可以使用兩步法和三步法PCR方案。
* = Volcano3G DNA聚合酶允許直接來自RNA模板的“零步”RT-PCR（沒有等溫逆轉(zhuǎn)錄步驟），因為逆轉(zhuǎn)錄也在循環(huán)PCR延伸步驟期間與DNA擴增同時發(fā)生。因此，逆轉(zhuǎn)錄步驟是任選的，并且在某些情況下可以省略。
** =通過運行溫度梯度理想地建立新的RT-PCR，以便找到每個引物對的*逆轉(zhuǎn)錄/退火/延伸溫度。引物的退火溫度受其核酸序列和反應(yīng)緩沖液組成（鹽和pH）的強烈影響。
通常，Volcano3G DNA聚合酶是*熱穩(wěn)定的，并且在55-95°C之間活躍。
反應(yīng)設(shè)置
使用的實驗建議：
在退火/延伸步驟中使用溫度梯度進(jìn)行PCR，以找到測定的宜溫度。
大多數(shù)RT-PCR分析在短時間80℃（1分鐘）變性步驟和50-55℃（10分鐘）的逆轉(zhuǎn)錄步驟以及標(biāo)準(zhǔn)PCR循環(huán)條件下都能很好地起作用。
建議的反應(yīng)設(shè)置
零件 | 卷 | 終濃度 |
引物前移（10μM） | 1.0μl | 500 nM（50-1000 nM） |
引物反向（10μM） | 1.0μl | 500 nM（50-1000 nM） |
探針（10μM） | xμl | 50 - 1000 nM |
Volcano3G RT-PCR 2x Master Mix | 10μl | 1X |
模板/樣品提取物* | yμl |
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不含核酸酶的水 | 總反應(yīng)體積高達(dá)20μl |
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* =推薦的模板濃度在0.004ng /μl-0.1μg/μl（總RNA或基因組DNA）之間。
在使用前仔細(xì)旋轉(zhuǎn)并混合所有溶液。
RT-PCR活性：測試Volcano3G RT-PCR Mix的成功RT-PCR性能。在實時PCR循環(huán)儀中從人總RNA提取物擴增151bp片段（HPRT1 mRNA），并將其顯示為單個擴增產(chǎn)物。
DNA聚合酶活性：使用人工DNA模板和DNA引物監(jiān)測Volcano3G DNA聚合酶活性并將其調(diào)整為特定的DNA聚合酶活性。
酶濃度通過蛋白質(zhì)特異性染色確定。有關(guān)批次特定濃度，請通過info@mypols.de查詢更多信息。
本產(chǎn)品采用冷藏包裝。請在抵達(dá)-20°C時存放產(chǎn)品。
通過以等分試樣存儲來小化凍融循環(huán)的次數(shù)。對于日常使用，我們建議將等分試樣保持在4°C。
Volcano3G來自Taq DNA聚合酶，因此它沒有任何RNase-H活性。在循環(huán)PCR延伸步驟期間，逆轉(zhuǎn)錄與DNA擴增同時發(fā)生。
然而，Volcano3G具有核酸酶結(jié)構(gòu)域作為Taq野生型酶，可用于基于水解的實時PCR。
貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 品牌 |
8100S | Volcano2G DNA聚合酶 | 250 U，5U /μl，50μl | mypols |
8100M | Volcano2G DNA聚合酶 | 1000U，5U /μl，200μl | mypols |
6101S | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix | 100 reactions á 25 µl | mypols |
1 x 1.25 ml | mypols | ||
6101M | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix | 500 reactions á 25 µl | mypols |
5 x 1.25 ml | mypols | ||
6201S | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix (+ROX) | 100 reactions á 25 µl | mypols |
1 x 1.25 ml | mypols | ||
6301S | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix (+GreenDye) | 100 reactions á 25 µl | mypols |
1 x 1.25 ml | mypols | ||
6401S | Volcano3G RT-PCR Probe 2x Master Mix (+GreenDye, +ROX) | 100 reactions á 25 µl | mypols |
1 x 1.25 ml | mypols |
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