上海起發(fā)為System Biosciences特約經(jīng)銷商，System Biosciences,簡稱SBI，美國加州灣區(qū)新成立的生技公司，致力于*、創(chuàng)新生物技術(shù)之開發(fā)，以研發(fā)利于基因及蛋白質(zhì)功能鑒定、研究之嶄新方法和工具為宗旨。 現(xiàn)階段研發(fā)重心為RNA干擾（RNAi）研究之相關(guān)工具。 System Biosciences (SBI) 致力于開發(fā)*、革新的技術(shù)，為客戶研究蛋白組學(xué)和基因組學(xué)功能提供研究工具。SBI 是專業(yè)的慢病毒產(chǎn)品公司，提供基于慢病毒的所有相關(guān)產(chǎn)品、質(zhì)粒、試劑盒及相關(guān)配套試劑和慢病毒延伸產(chǎn)品如IPS細(xì)胞多功能性誘導(dǎo)試劑盒和RNAi篩選文庫。
SBI CAS720A-KIT說明書
品牌：System Biosciences
貨號：CAS720A-KIT
增強(qiáng)您的一體化Cas9 SmartNuclease質(zhì)粒與多路復(fù)用gRNA傳遞
通過將CAG-T7-hspCas9-H1-gRNA一體化Cas9 SmartNuclease TM質(zhì)粒與Multiplex gRNA克隆試劑盒相結(jié)合，輕松提高功能?？傊@兩種產(chǎn)品可以實(shí)現(xiàn)更廣泛的需要多種gRNA的復(fù)雜基因組編輯項(xiàng)目。
您可以獲得CAG-T7-hspCas9-H1-gRNA All-in-one Cas9 SmartNuclease質(zhì)粒的所有優(yōu)點(diǎn)：
結(jié)合Multiplex gRNA克隆試劑盒的優(yōu)點(diǎn)：
正如我們所有的Cas9交付選項(xiàng)一樣，CAG-T7-hspCas9-H1-gRNA質(zhì)粒在功能上得到了驗(yàn)證，并得到了我們的專家團(tuán)隊(duì)的支持 - 如果您有基因組工程問題，只需通過電子郵件tech @ systembio發(fā)送問。 com。
為什么建議使用人力資源定位向量
盡管單獨(dú)由Cas9引起的DSB可導(dǎo)致基因敲除，但SBI建議使用HR靶向載體（也稱為HR供體載體）以實(shí)現(xiàn)更有效和的突變。人力資源捐助者可以提供正面或負(fù)面選擇的要素，以確保更容易識別成功的突變事件。此外，HR供體可以包含高達(dá)6-8 kb的開放閱讀框用于基因敲入或標(biāo)記，并且當(dāng)5'或3'同源臂中包含小突變時(shí)，可以進(jìn)行特定的靶向基因編輯。
使用此表格選擇適合您的CRISPR / Cas9產(chǎn)品：
對于此應(yīng)用程序 | 使用這些產(chǎn)品 | |
修改生物 | 使用這些產(chǎn)品 | 使用這些產(chǎn)品 |
·基因標(biāo)記 ·轉(zhuǎn)基因生物的產(chǎn)生 ·模型生物工程 | 創(chuàng)造轉(zhuǎn)基因動物 | ·注射Cas9 mRNA＆ ·gRNA合成試劑盒 ·純化的Cas9蛋白 |
動物模型中的體內(nèi)基因組編輯 | ·AAV-Cas9載體 ·純化的Cas9蛋白 | |
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修改細(xì)胞系 |
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·穩(wěn)定的KO，KI和基因組 ·編輯體細(xì)胞 ·轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系的生成 ·基于細(xì)胞的疾病模型 | 可轉(zhuǎn)染的細(xì)胞 | ·Cas9質(zhì)粒 ·純化的Cas9蛋白 |
·AAV-Cas9 Vect難以轉(zhuǎn)染細(xì)胞系， ·主要細(xì)胞 ·造血細(xì)胞 ·干細(xì)胞 ·Lenti-Cas9系統(tǒng) | ·AAV-Cas9載體 ·Lenti-Cas9系統(tǒng) | |
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篩選 |
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·全基因組調(diào)查 ·gRNA庫屏幕 ·功能屏幕 | 所有應(yīng)用都需要 穩(wěn)定的Cas9過表達(dá) | ·Lenti-Cas9系統(tǒng) ·AAVS1安全港Cas9 ·敲入系統(tǒng) ·純化的Cas9蛋白 |
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臨床前應(yīng)用 |
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·非目標(biāo)事件是受關(guān)注的問題 | 所有應(yīng)用 | ·Cas9切割片，提供所有交付格式 ·純化的Cas9蛋白 |
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多變量同時(shí)工程 |
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| 所有應(yīng)用 | ·多重gRNA克隆試劑盒，兼容所有Cas9遞送選項(xiàng) |
使用SBI的一體化Cas9 SmartNuclease質(zhì)粒和Mulitplex gRNA克隆試劑盒
工作流程一目了然
圖1. Multiplex gRNA克隆試劑盒工作流程。
使用Multiplex gRNA克隆試劑盒準(zhǔn)備您的多重gRNA插入片段（圖1）
PrecisionX Multiplex gRNA克隆試劑盒提供H1和U6啟動子區(qū)域，可輕松構(gòu)建多個(gè)gRNA盒（圖1）。在步驟1中，將含有所需gRNA（由用戶設(shè)計(jì)）和腳手架 - 啟動子區(qū)段（來自試劑盒）的重疊末端的引物在PCR反應(yīng)中合并以產(chǎn)生含有兩種gRNA的PCR擴(kuò)增子。在步驟2中，將PCR擴(kuò)增子與融合反應(yīng)混合物一起與用于無縫構(gòu)建的線性化表達(dá)載體組合。
用CRISPR / Cas9進(jìn)行基因組工程
有關(guān)使用CRISPR / Cas9技術(shù)進(jìn)行基因組工程的一般指導(dǎo)，請查看我們的CRISPR / Cas9教程以及以下應(yīng)用筆記：
CRISPR / Cas9基因敲除應(yīng)用簡報(bào)（PDF）»
CRISPR / Cas9基因編輯應(yīng)用簡報(bào)（PDF）»
CRISPR / Cas9基因標(biāo)簽應(yīng)用簡報(bào)（PDF）»
CRISPR / Cas9基礎(chǔ)
通過仔細(xì)選擇靶序列和設(shè)計(jì)供體質(zhì)粒進(jìn)行同源
重組，您可以使用CRISPR / Cas9實(shí)現(xiàn)且高度靶向的基因組修飾。
系統(tǒng)
Cas9蛋白質(zhì) - 指導(dǎo)RNA（gRNA）指導(dǎo)位點(diǎn)特異性雙鏈DNA切割，與目標(biāo)DNA中的原型銜接子基序（PAM）相鄰。
引導(dǎo)Cas9切割靶基因組中的同源區(qū)域的gRNA- RNA序列。僅當(dāng)gRNA同源性與PAM相鄰時(shí)才有效切割。
PAM- prototospacer銜接子基序NGG是目標(biāo)DNA序列，如果指向gRNA，spCas9將從上游切除。
工作流程一目了然
設(shè)計(jì)：選擇gRNA和HR供體質(zhì)粒。選擇gRNA位點(diǎn)并設(shè)計(jì)供
體質(zhì)粒決定同源重組事件是否導(dǎo)致敲除，
敲入，編輯或標(biāo)記。
構(gòu)建：將gRNA克隆到一體化Cas9載體中。將5'和3'同源臂克隆到HR
供體質(zhì)粒中。如果創(chuàng)建基因敲入，將所需基因克隆到HR供體中。
共轉(zhuǎn)染或CO-INJECT：介紹Cas9，gRNA和HR捐贈者進(jìn)入靶細(xì)胞
使用共轉(zhuǎn)染質(zhì)粒，共轉(zhuǎn)導(dǎo)為慢病毒，或共注射的mRNA。
選擇/屏幕：選擇或篩選突變體并驗(yàn)證。
VALIDATE：基因型或序列推定的突變體，以驗(yàn)證單個(gè)或雙等位基因轉(zhuǎn)化。
在多個(gè)基因組位置同時(shí)進(jìn)行編輯
請注意，本研究使用略有不同的All-in-One Cas9 SmartNuclease質(zhì)粒設(shè)計(jì)，但預(yù)期結(jié)果相似。
圖2. Multiplex gRNA克隆試劑盒可以有效地提供四種gRNA。 （A）我們使用了使用Multilplex gRNA克隆試劑盒和All-in-one Cas9 SmartNickase載體創(chuàng)建的四重gRNA，以從具有穩(wěn)定整合的CMV的細(xì)胞系中去除（B） 1260bp的GFP-T2A-RFP區(qū)段-GFP-T2A-RFP表達(dá)盒。我們將這四種gRNA克隆到Cas9 SmartNickase載體（EF1Nickase-H1-gRNA）中以指導(dǎo)兩個(gè)雙切口事件 - 一個(gè)在GFP的5'末端，另一個(gè)在RFP基因的3'末端。（C）使用僅在GFP和RFP基因外部的引物進(jìn)行的PCR測定在不存在SmartNickase載體（泳道1）的情況下產(chǎn)生1600bp片段，并且在存在Cas9SmartNickase-4gRNA構(gòu)建體（泳道2）的情況下產(chǎn)生340bp片段，證明SmartNickase介導(dǎo)的配對雙切口和GFP-T2A-RFP基因組缺失的效率。（D） GFP和RFP活性的缺失也可以在功能測定中看到，通過降低GFP和RFP熒光。
上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司是專業(yè)從事生物技術(shù)產(chǎn)品銷售的高科技企業(yè)，是國內(nèi)生物試劑、儀器、消耗品領(lǐng)域的企業(yè)之一。起發(fā)公司自成立以來，連續(xù)2年高速成長。公司的發(fā)展目標(biāo)是建成專業(yè)從事生物技術(shù)產(chǎn)品銷售、生產(chǎn)與開發(fā)的公司。
上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司是實(shí)驗(yàn)試劑一站式采購服務(wù)商
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